PurificaÃÃo e caracterizaÃÃo de uma tripsina sensÃvel a metal pesado do peixe Caranx hippos
AUTOR(ES)
Helane Maria Silva Costa
DATA DE PUBLICAÇÃO
2007
RESUMO
A tripsina-sÃmile extraÃda do ceco pilÃrico de xarÃu (Caranx hippos) foi purificada por um procedimento de trÃs etapas: tratamento tÃrmico, precipitaÃÃo com sulfato de amÃnio e cromatografia de gel-filtraÃÃo em Sephadex G-75. Os efeitos de vÃrios Ãons metÃlicos e inibidores de proteases na atividade digestiva da enzima in vitro foram determinados. As propriedades fÃsico-quÃmicas e cinÃticas da tripsina foram estabelecidas. O pH e temperatura Ãtima de reaÃÃo encontrada foram 8,0 e 50ÂC, respectivamente. ApÃs 30 minutos de incubaÃÃo a 50ÂC, foi detectada uma perda de 20% da atividade trÃptica. A constante de Michaelis Menten foi 1,21 0,38 mM usando benzoil-DL-arginina-pnitroanilida (BApNA) como substrato. Uma Ãnica banda (35,2 kDa) foi observada quando a amostra da enzima purificada foi aplicada em gel de eletroforese utilizando sulfato sÃdico de dodecila (SDS-PAGE, 12,5%). Atividade com substrato especÃfico e inativaÃÃo por inibidores de protease forneceram evidÃncias adicionais que uma tripsina à responsÃvel por esta atividade proteolÃtica. A tripsina de C. hippos apresentou sensibilidade a metais pesados. Utilizando soluÃÃes de Ãons na concentraÃÃo de 1 mM, a tripsina foi inibida na ordem decrescente: Cd2+=Al3+>Zn2+>Cu2+>Pb2+>Hg2+. Menor efeito foi detectado com Co2+, K+, Li+, Ba2+, Mn2+, Mg2+e Ca2+. Contudo, a concentraÃÃo tÃo baixa quanto 0,01 ppm (10 μg/mL) dos Ãons Zn2+, Cu2+, Hg2+, Pb2+, Cd2+ e Al3+ foram suficientes para inibir 34%, 33%, 33%, 32%, 29% e 28%, da atividade proteolÃtica, respectivamente
ASSUNTO(S)
peixe marinho tripsina trypsin xarÃu (caranx hippos) bioquimica metal pesado crevalle jack (caranx hippos) marine fish biomonitor species heavy metal espÃcies biomonitores
Documentos Relacionados
- Uma lectina do lÃquen Cladonia verticillaris: purificaÃÃo e caracterizaÃÃo parcial
- PurificaÃÃo e caracterizaÃÃo de proteases do Saramunete, Pseudupeneus maculatus, (Teleostei â Mullidae), Bloch, 1793
- PurificaÃÃo e caracterizaÃÃo de uma nova fosfolipase A2 Ãcida da peÃonha de Bothrops pauloensis
- PurificaÃÃo e caracterizaÃÃo parcial de uma lectina da entrecasca da Caesalpinia ferrea var. leiostachya Benth
- PurificaÃÃo e caracterizaÃÃo parcial da lectina de raiz de Bauhinia monandra (BmoRL)