PurificaÃÃo e caracterizaÃÃo parcial de uma lectina da entrecasca da Caesalpinia ferrea var. leiostachya Benth

AUTOR(ES)

Raquel Siebra Paes Barreto

DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

As lectinas sÃo proteÃnas ou glicoproteÃnas que se ligam reversivelmente a carboidratos com diferentes graus de seletividade, sÃo encontradas em uma variedade de organismos e estÃo envolvidas em numerosos processos celulares. Neste trabalho foi avaliada a presenÃa de lectina na entrecasca da Caesalpinia ferrea var. leiostachya Benth (CfeBL), planta com ampla distribuiÃÃo no Brasil e conhecida vulgarmente como pau-ferro. Extrato bruto da entrecasca da C. ferrea foi obtido em NaCl 0,15 M. Este extrato foi submetido a fracionamento com sulfato de amÃnio (F 0-80%, F80) e ensaios de atividade hemaglutinante (AH) com diferentes tipos de eritrÃcitos. A fraÃÃo F80 foi cromatografada em uma coluna de quitina que foi eluida, respectivamente, com NaCl 0,15M e Ãcido acÃtico 1 M; CfeBL foi eluÃda com Ãcido acÃtico 1M. A AH da CfeBL foi, entÃo, avaliada em presenÃa de Ãons divalentes (Ca++ , Mg++), diferentes valores de pH (2- 12), por carboidratos, glicoproteÃnas e ensaios da estabilidade tÃrmica em diferentes temperaturas (30 â 100 ÂC, por 30 minutos). A massa molecular da proteÃna nativa foi determinada usando uma coluna de Superdex 75-30 cm. Amostras da CfeBL foram submetiads a SDSPAGE em condiÃÃes desnaturantes e redutoras. Eletroforese bidimensional foi realizada para a verificaÃÃo do ponto isoelÃtrico (pI) e massa molecular. O grau de fluorescÃncia da CfeBL foi determinado atravÃs do espectrÃmetro de fluorescÃncia. EritrÃcitos de coelho foram usados para avaliaÃÃo da AH. A AH da CfeBL nÃo sofreu alteraÃÃo em presenÃa de Ãons nem em diferentes valores de pH. A CfeBL continuou ativa apÃs aquecimento à 100 ÂC, foi parcialmente inibida pelo carboidrato N-acetil-D-glicosamina e as glicoproteÃnas fetuÃna, soro de coelho, azocaseÃna, caseÃna, ovoalbumina, soro fetal, tiroglobulina e peroxidase nÃo inibiram a AH da CfeBL. A CfeBL apresentou duas bandas por SDSPAGE e o sistema Superdex 75-30 cm revelou dois picos protÃicos com 19 e 15 KDa. Na eletroforese 2D a massa molecular estimada foi de 20 e 15 KDa e o pI de 4,53 e 5,14. NÃo foi observado crescimento de bactÃrias gram-positivas ou negativas em amostras de CfeBL. Uma lectina, CfeBL, especÃfica para N-acetil-D-glicosamina, estÃvel em diferentes temperaturas e variaÃÃes de pH, foi obtida da entrecasca de C. ferrea por cromatografia de afinidade em quitina, com potencial atividade antimicrobiana

ASSUNTO(S)

lectin - purification caesalpinia fÃrrea bioquimica lectin - caracterization lectin caesalpinia fÃrrea lectina lectina - caracterizaÃÃo lectina - purificaÃÃo

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