Produção, purificação e caracterização de β-glicosidases livre e imobilizada de Debaryomyces hansenii UFV-1 / Production, purification and characterization of free and immobilized β-glucosidases from Debaryomyces hansenii UFV-1

AUTOR(ES)
FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

22/02/2011

RESUMO

Os objetivos deste trabalho foram estabelecer melhores condições de cultivo da levedura Debaryomyces hansenii UFV-1 para produção de β-glicosidases, purificar e caracterizar esta enzima, imobilizar as células da levedura contendo a β-glicosidase intracelular em alginato de cálcio e caracterizar a enzima imobilizada. Para produção da β-glicosidase intracelular, a levedura foi cultivada por 12 h em meio YP contendo celobiose como fonte de carbono. A enzima foi purificada por cromatografias de troca iônica, filtração em gel e interação hidrofóbica e, ao final do processo, a β-glicosidase apresentou um fator de purificação de 99,3 vezes, com um rendimento de 8 %. A massa molecular da enzima foi de aproximadamente 198 kDa, quando estimada por SDS-PAGE, e de aproximadamente 178 kDa, quando estimada por filtração em gel. A enzima apresentou atividade máxima em pH 6,0 e na temperatura de 45 C. Os valores de meia-vida para a β-glicosidase foram de 356, 312, 73 e 5 minutos, nas temperaturas de 40, 45, 50 e 55 C, respectivamente. Os valores de KM e Vmax, utilizando o substrato ρNPβGlc, foram 0,434 mM e 0,021 mM/min, respectivamente. A enzima apresentou especificidade absoluta para glicose em posição β e a atividade enzimática foi completamente inibida por cloreto de ferro, nitrato de prata e SDS, todos nas concentrações finais de 0,2 e 2 mM. Após imobilização das células de D. hansenii em alginato de cálcio, a enzima apresentou máxima atividade em pH 5,5 e na temperatura de 50 C. A imobilização proporcionou à enzima maior termoestabilidade nas temperaturas de 45 e 50 C. Os valores de KM app. e de Vmax app., com o substrato ρNPβGlc, foram, respectivamente, 4,35 mM e 3,63 μmol de ρNP/min/g célula. D. hansenii é uma levedura não patogênica e encontrada em diversos tipos de alimentos. Assim, a utilização das células desta levedura imobilizadas em alginato de cálcio, na indústria de alimentos, não acarretaria problemas para a saúde humana. Neste caso, a enzima é mais estável e o processo é mais econômico por não haver gastos com purificação enzimática e ainda pela possibilidade de reutilização das esferas de alginato contendo a enzima β-glicosidase.

ASSUNTO(S)

β -glicosidases livre debaryomyces hansenii enzimologia β -glucosidases debaryomyces hansenii

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