Isolation and characterization of three distinct forms of lipases from Candida rugosa produced in solid state fermentation
AUTOR(ES)
Benjamin, Sailas, Pandey, Ashok
FONTE
Brazilian Archives of Biology and Technology
DATA DE PUBLICAÇÃO
2001-06
RESUMO
Três formas distintas (Lip A, Lip B e Lip C) de lipases extracelulares (EC - 3.1.1.3), produzidas por Candida rugosa em fermentação no estado sólido (SSF) foram purificadas e caracterizadas. SSF foi conduzida em colunas de vidro, utilizando torta de óleo de coco e farelo de trigo. A enzima foi purificada do extrato aquoso do material fermentado por precipitação com sulfato de amônio, diálise, ultra - filtração e filtração em gel com Sephadex - 200 para uma purificação de 43 vezes e 64.35 - mg / ml de atividade específica. SDS - PAGE da enzima purificada revelou três faixas distintas, enquanto indicando a existência de três formas isômeras, Lip A, Lip B e Lip C com peso molecular aparente de aproximadamente 64,000, 62,000 e 60,000 Da, respectivamente. Todos as três formas isômeras eram ativas opticamente a 35-40ºC e pH 7-8. Elas mostraram diferenças marcantes nos valores de Km com diferentes triacilgliceróis saturados e insaturados. Ag + + e Hg + + inibiram fortemente a atividade enzimática de todas as três formas isômeras, Mn + + não produziu efeito e Ca + + e Mg + + aumentaram a atividade. EDTA inibiu fortemente as atividades enzimáticas dos isômeros. Porém, atividades de todas as três lipases eram completamente inibidas por inibidores de protease serina como 3,4 - dicloroisocomarina, pefabloc e parcialmente através de fluoreto de fenilmetanesulfonil. Este é o primeiro relatório que descreve a purificação e caracterização de lipases isoméricas produzidas por C. rugosa em culturas sólidas. Estes isômeros de lipase com características diversas produzidas em culturas sólidas podem obter aplicação potencial em campo biomédico.
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