Clonagem da oncoproteÃna E6 do papilomavÃrus humano (HPV) sorotipo 16

AUTOR(ES)

Elaine VirgÃnia Martins de Souza

DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

Cerca de 490.000 novos casos de cÃncer cervical tÃm ocorrido entre mulheres do mundo todo a cada ano. No Brasil, a estimativa de incidÃncia aponta o cÃncer de colo do Ãtero como o terceiro mais comum entre as mulheres no ano de 2006, com estimativa de 19.260 novos casos em todo o paÃs. Segundo o INCA (2006), no estado de Pernambuco, estima-se que ocorram 22,16 novos casos para cada 100.000 mulheres. O papilomavirus humano (HPV) à o principal agente envolvido em lesÃes benignas e malignas, sendo caracterizados como baixo-risco e alto-risco, respectivamente. Os HPVs de alto-risco, como os sorotipos 16 e 18, sÃo capazes de produzir as oncoproteÃnas E6 e E7 que alteraram as funÃÃes das proteÃnas regulatÃrias do ciclo, como as proteÃnas p53 e retinoblastoma, respectivamente. Devido à dificuldade de cultivo do HPV em cultura de tecidos, a clonagem destes genes representa uma possibilidade de estudos mais avanÃados. Entre os novos sistemas de expressÃo de proteÃnas heterÃlogas, pode-se destacar Pichia pastoris que à facilmente manipulada, e possui a capacidade de expressar a proteÃna de interesse em altos nÃveis e tambÃm realizar modificaÃÃes pÃs-transducionais. Assim, o objetivo do presente trabalho à clonar o gene E6 do HPV 16 em P. pastoris. Para tanto, o gene E6 do HPV 16 (477 bp) foi clonado diretamente no vetor pPICZA (3.300 bp), amplificado em Escherichia coli DH5α e linearizado com SacI para ser integrado ao genoma da levedura por recombinaÃÃo. Todos os clones obtidos foram submetidos à PCR com primers especÃficos, linearizaÃÃes com enzimas e seqÃenciamento. O resultado obtido com o PCR da P. pastoris transformante apresentou tamanho correspondente ao gene E6. A seqÃÃncia gÃnica dos nucleotÃdeos apresentou um âscoreâ de 93% quando alinhado com a seqÃÃncia gÃnica da E6 do HPV 16 depositada nos bancos de dados gÃnicos. Os clones obtidos permitirÃo a expressÃo desta oncoproteÃna por P. pastoris, e desta forma, o desenvolvimento de vacinas terapÃuticas ou medicamentos sÃtio-especÃfico capazes de erradicar a doenÃa

ASSUNTO(S)

papilomavÃrus hpv-16 recombinant protein p. pastoris oncogene e6 pichia pastoris oncogene bioquimica papillomavirus hpv-16 e6 protein

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