Purificação e atividade biologica da crotoxina e de suas sub-unidades crotapotina e fosfolipase A2 sobre agregação de plaquetas humanas

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DATA DE PUBLICAÇÃO

1992

RESUMO

A crotoxina, o componente mais tóxico isolado do veneno de Crotalus durissus terrificus, é um complexo proteico reversível composto por um peptídeo ácido, não tóxico e sem ativadade enzimática (crotapotina) e um componente básico, responsável pela toxicidade do complexo, a fosfolipase A2 (PLA2). Sabendo-se que várias proteínas isoladas a partir de venenos interferem na coagulação sanguínea e agregação plaquetária, o objetivo deste trabalho foi o estudo da atividade da crotoxina sobre a agregação plaquetária. A crotoxina foi isolada através de gel filtração do veneno bruto em uma coluna de Sephadex G-75, eluída com tampão bicarbonato de amônio (0.1 M; pH 8.0). A agregação das plaquetas humanas lavadas foi monitorada utilizando-se um agregômetro Payton e a liberação de TXA2 foi medida através de radioimunoensaio (RIA). O fracionamento de 100 mg de veneno, resultou em três principais picos, sendo o segundo pico correspondente à crotoxina. O grau de pureza da crotoxina foi confirmado, utilizando-se o método de cromatografia de alto desempenho (HPLC) através de uma coluna C 18 µ Bondapack. Crotoxina (15-50 µg/ml), produz uma agregacão de plaquetas lavadas de modo dose-dependente e irreversível, agregação esta inibida por uma pré-incubação da suspensão de plaquetas com SNP (500 µM) ou lIoprost (100 nM). A crotoxina também induz a liberação de TXB2 (207±8 ng/ml, n=6). Nossos resultados demonstram que a crotoxina induz a agregação de plaquetas humanas lavadas, independente da liberação de produtos de ciclo-oxigenase, assim como apresenta importante atividade coagulante

ASSUNTO(S)

bioquimica farmacologia

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