[PCR quantitativo em tempo real, baseado em guia molecular para detecção de infeção por Brucella]
AUTOR(ES)
Zhao, C.; Xu, W.; Gao, W.
FONTE
Arq. Bras. Med. Vet. Zootec.
DATA DE PUBLICAÇÃO
2020-05
RESUMO
RESUMO O objetivo deste comunicado é desenvolver um método quantitativo PCR em tempo real, baseado em guia molecular (MB) (MB-qPCR) para detecção de infecção por espécies de Brucella, e avaliar seu potencial de utilização clínica. Os primers e as sondas MB foram desenhados para amplificação específica e determinação de sequência conservada do código do gene para os primeiros 58-aa da proteína de membrana externa OMP-2a, que é compartilhada em cinco espécies de Brucella epidêmicas. A avaliação metodológica foi realizada por análise de sensibilidade, especificidade, coeficiente de variação intra e inter, e a linearidade do qPCR. O potencial diagnóstico foi avaliado comparando-se o método qPCR desenvolvido com ensaios de exames bacteriológicos convencionais, incluindo os testes de soroaglutinação convencionais (SATs) e os testes do Rosa Bengala (RBPTs). O método exibiu alta sensibilidade (tão baixo quanto 50 cópias) e grande faixa de linearidade (102-108 cópias). Nenhuma reação cruzada foi encontrada com bactéria clínica comum. A sensibilidade diagnóstica foi superior ao exame bacteriológico, e a especificidade diagnóstica foi superior ao SAT ou ao RBPT. Um método MB-qPCR altamente sensível e específico para DNA de Brucella foi estabelecido com sucesso, provando ser uma ferramenta útil no diagnóstico molecular de brucelose.
Documentos Relacionados
- Identificação de genes de referência para análise de expressão por PCR quantitativo em tempo real, em soja submetida à seca
- PCR em tempo real para detecção de Brucella ovis e Histophilus somni em urina e sêmen ovino
- Sistema baseado em conhecimento para controle e guia operacional em tempo real de alto forno
- PCR em tempo real para detecção do vírus da doença de Aujeszky
- Detecção de agentes associados com doenças respiratórias de suínos por PCR em tempo real
