Isolamento e caracterizaÃÃo parcial de lectinas em sementes de Capparis yco

AUTOR(ES)

ClÃbia Cleriane Pereira RabÃlo

DATA DE PUBLICAÇÃO

2005

RESUMO

PurificaÃÃo de formas moleculares mÃltiplas da lectina de sementes de Capparis yco (CySeL) foi desenvolvida atravÃs de fracionamento com sulfato de amÃnio e cromatografia das fraÃÃes (F) em CM-Celulose. O protocolo foi efetivo para obter, a partir das F20-40 e F40-80, CySeL1 (12 mg) e CySeL2 (9 mg), respectivamente; adicionalmente revelou diferenÃas nas propriedades de cargas das isoformas. Cromatografia em coluna de Hitrap SP, nÃo foi eficiente na separaÃÃo das isoformas. CySeL1 e CySeL2 foram inespecÃficas para eritrÃcitos humanos e elevadas atividades hemaglutinantes especÃficas (AHE) foram detectadas com cÃlulas de coelho. AH de CySeL1 foi inibida com monossacarÃdeos e glicoproteÃnas, enquanto CySeL2 reconheceu somente glicoproteÃnas. Cromatografia de afinidade em coluna de fetuÃna-agarose mostrou que a AH da F20-40 foi mais retida do que a AH da F40- 80. O valor de pH e a presenÃa de Ãons interferiram diferentemente na AH das isoformas; somente CySeL2 permaneceu ativa em pH 10 e foi estimulada por 40 mM de Ca2+ e Mg2+. CySeL1 e CySeL2 apresentaram o mesmo padrÃo eletroforÃtico. Em PAGE sob condiÃÃes nativas, trÃs bandas protÃicas que foram extraÃdas do gel mostraram AH; SDS-PAGE na presenÃa de β-mercaptoetanol revelou dois polipeptÃdeos de Mr 15 e 14 kDa. ColoraÃÃo do gel para carboidratos mostrou a natureza glicoprotÃica da subunidade de 14 kDa. Quantidades miligramas de isoformas da lectina de sementes de C. yco foram obtidas. As diferenÃas estruturais de CySeL1 e CySeL2 detectadas na cromatografia em CM-Celulose, inibiÃÃo da AH com monossacarÃdeos e efeito do pH e ions na AH associado ao elevado rendimento da purificaÃÃo das proteÃnas, indicam a potencial utilizaÃÃo de CySeL1 e CySeL2 em investigaÃÃes estruturais e de aplicaÃÃo biotecnolÃgica.

ASSUNTO(S)

bioquimica cromatografia - fracionamento lectinas sulfato de amÃnio - fracionamento capparis yco - sementes

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