Extração de pró-insulina humana recombinante produzida em sementes de milho transgênico

AUTOR(ES)

Cristiane Sanchez Farinas

DATA DE PUBLICAÇÃO

2004

RESUMO

Bioprodutos de aplicação fannacêutica têm sido produzidos em sistemas transgênicos diversos, incluindo células de animais, bactérias e leveduras. No futuro, é esperado que a demanda por novas proteínas terapêuticas cresça substancialmente, sendo que o uso de plantas como bioITeatores tem se mostrado como uma das alternativas economicamente mais atraentes para a produção de proteínas recombinantes em larga escala. O objetivo deste trabalho foi estudar o processo de extração da pró-insulina humana recombinante produzida no endosperma de milho transgênico. Neste contexto, avaliaram-se os extratos aquosos de seis variedades de milhos comerciais quanto às epropriedades relacionadas purificação de à recuperação bioprodutos (RPB) ? concentração componentes nativos do milho de (carboidratos. compostos fenólicos e proteínas), taxa de filtração e teor de lipídeos - e realizou-se a seleção e otimização das variáveis operacionais relevantes na extração da pró-insulina em conjunto com a rninimização dos componentes nativos do milho. A análise das superfícies de resposta, geradas a partir do planejamento experimental, e do teste de Tukey indicou que a condição õtima para a extração de pró-insulina, utilizando tampão bicarbonato de sódio 50 rnM pH 10,0 e DTT 5 mM. é aquela na qual a razão volume:massa (v:m) é de 10:1 e a temperatura é de 25°C. Esta condição. em um tempo de extração de 2h e agitação a 500 rprn, é a indicada como ótima para a extração da pró-insulina humana recombinante do milho transgênico. Os valores máximos de concentração de pró-insulina obtidos foram 20,72 j.1g/rnl ou 0,45% da proteína total solúvel. Como conclusões gerais, constatou -se que a escolha da variedade de milho comercial influenciou a complexidade do extrato; a presença do agente redutor no tampão de extração foi importante na solubilização da pró-insulina; a extração de pró-insulina foi mais eficiente em tampão alcalino em relação ao tampão alcoólico e, finalmente, as variáveis de processo que mais influenciaram a extração foram a temperatura e a razão v:m

ASSUNTO(S)

extração (química) insulina plantas transgênicas dna recombinante extraction (chemistry) insulin transgenic plants recombinant dna

Documentos Relacionados

• Extração de pro-insulina humana recombinante produzida em sementes de milho transgenico
• Purificação de pro-insulina humana recombinante com cauda de poli(histidina) : cromatografia em membranas de afinidade com ions metalicos imobilizados
• Produção dos hormonios recombinantes de crescimento e pro-insulina humanos em plantas transgenicas de milho
• Expressão de um cDNA da proinsulina humana em sementes de tabaco transgenico
• Associação entre proinsulina, insulina, fator proinsulina/insulina e índice de resistência insulínica com a síndrome metabólica