Atividade de galactinol sintase de semente de soja determinada por um novo ensaio calorimétrico

AUTOR(ES)

RIBEIRO, MARLUCI, FELIX, CARLOS R., LOZZI, SILENE DE PAULINO

FONTE

Revista Brasileira de Fisiologia Vegetal

DATA DE PUBLICAÇÃO

2000

RESUMO

Galactinol sintase (GS) é a enzima-chave para a biossíntese de oligosacarídeos de rafinose (RO), que são os fatores antinutricionais causadores de flatulência, os quais estão presentes em sementes de soja e em outros legumes. A GS catalisa a formação de galactinol e UDP a partir de UDP-gal e mioinositol. A atividade dessa enzima é determinada atualmente pelo método radioisotópico que, apesar de adequado tecnicamente, apresenta vários inconvenientes, tais como a necessidade de substrato de alto custo, bem como de cuidados adicionais e serviços especializados para descarte dos resíduos radioativos. Assim, desenvolveu-se um método colorimétrico alternativo ao método radioisotópico, baseado na determinação colorimétrica indireta do UDP formado pela hidrólise enzimática (apirase) desse nucleotídeo e determinação do Pi resultante pelo método de Fiske & SubbaRow, com modificações. A cor desenvolvida é estável e o método é sensível para detecção de quantidades nanomolares de Pi. Os perfis de atividade da GS em sementes de soja em diferentes fases de desenvolvimento, determinados pelos métodos colorimétrico e radioisotópico, são semelhantes. Adicionalmente, a GS de sementes de soja foi purificada (46-vezes) por tratamento do extrato das sementes com MnCl2, e uma seqüência de cromatografias em colunas de DEAE-Sepharose, Phenyl-Sepharose CL-4B e Q-Sepharose. As atividades de GS no extrato bruto e na amostra parcialmente purificada foram máximas em pH 7.0 e 50 ºC. Ditiotreitol e MnCl2 aumentaram consideravelmente a atividade da enzima parcialmente purificada. Enquanto UDP-glc pode ser hidrolisado pela enzima com uma atividade relativa correspondendo a 49% da atividade contra UDP-gal, UDP-man e sacarose foram completamente ineficazes como substratos alternativos. Os valores de K M para conversão de UDP-gal e mio-inositol foram de 2,0 mM e 2,93 mM, respectivamente, determinados pelo método de Lineaweaver-Burk.

ASSUNTO(S)

flatulência galactinol sintase ensaio colorimétrico oligosacarídeos de rafinose

Documentos Relacionados

• Expressão de três isoformas de galactinol sintase em plantas de Coffea arabica L. submetidas a estresses abióticos
• Identificação de um novo Antígeno de Paracoccidioides brasiliensis (Lumazina Sintase) através da Técnica de IVIAT
• Inibição da atividade da citrato sintase cerebral em um modelo animal de sepse
• Atividade da óxido nítrico sintase em plaquetas humanas: um método otimizado
• Produção de flavonoides e atividade oxido nitrico sintase na resposta de defesa de soja ao fungo causador do cancro da haste