Uso de sondas fluorescentes na avaliação da viabilidade de Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis por citometria de fluxo

AUTOR(ES)
FONTE

Fitopatologia Brasileira

DATA DE PUBLICAÇÃO

2006-08

RESUMO

A determinação da viabilidade de bactérias através da técnica tradicional de plaqueamento em meios seletivos de cultura é considerada um processo longo e demorado. Os métodos baseados na atividade enzimática ou na integridade da membrana citoplasmática são mais rápidos e podem ser considerados como alternativas para acessar a viabilidade de bactérias fitopatogênicas. Este trabalho teve o objetivo de avaliar a viabilidade de suspensões de culturas puras da bactéria Clavibacter michiganensis subsp. michiganenesis (Cmm) usando as sondas fluorescentes "Calcein acetoxy methyl ester" (Calcein AM), "carboxyfluorescein diacetate" (cFDA), e "propidium iodide" (PI), em combinação com o citômetro de fluxo. Células de Cmm tratadas à temperatura de 80 °C por 30 min (não viáveis) e células não tratadas (viáveis), marcadas com Calcein AM, cFDA, PI, ou utilizando a combinação das sondas Calcein AM e cFDA com PI, puderam ser distinguidas baseado na intensidade de fluorescência através da análise do citômetro de fluxo. Células não tratadas mostraram nível elevado de intensidade de fluorescência no espectro verde, devido à coloração das células com Calcein AM ou cFDA, enquanto que as células danificadas (não viáveis) mostraram nível elevado de intensidade de fluorescência no espectro vermelho, devido à coloração com PI. O citômetro de fluxo permitiu também a quantificação rápida das células viáveis de Cmm marcadas com Calcein AM ou cFDA e das células tratadas marcadas com PI. Portanto, a aplicação do citômetro de fluxo, em combinação com sondas fluorescentes, parece ser uma técnica promissora para acessar a viabilidade de células de Cmm, quando estas são marcadas com Calcein AM ou utilizando a combinação de Calcein AM com PI.

ASSUNTO(S)

cfda calceina am propidium iodide

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