Regeneração e transformação genética em melão (Cucumis melo L.), cv. Gaúcho / Regeneration and genetic transformation in melon (Cucumis melo L.) cv. Gaucho

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo eficiente de regeneração para o melão (Cucumis melo L.), cv. Gaúcho, visando posterior transformação genética do mesmo. Para tal fim foram realizados três experimentos. No primeiro, os cotilédones foram divididos em 2, 3, 4 e 5 partes iguais e, inoculados em meio MS contendo 30 g L-1 de sacarose, 0,9 mg L-1 BAP, 0,3 mg L-1 ABA e 2,2 g L-1 CaCl2. No segundo experimento, utilizando o mesmo meio de cultura do experimento anterior, os cotilédones foram submetidos a diferentes densidades de fluxo de fótons. No terceiro procurou-se estabelecer as condições para germinação das sementes e sua influência na regeneração cotiledonar sob diferentes concentrações de BAP. Observou-se que cotilédones seccionados em 5 partes apresentaram maior média de explantes regenerantes. Já os cotilédones que permaneceram sob intensidade luminosa de 2 μmol m-2 s-1 apresentaram maior média de explantes regenerantes e os que ficaram no escuro apresentaram maior média de explantes com calos e raiz. Observou-se também que quanto maior o período germinativo e maiores concentrações de BAP no meio regenerativo, menor é a taxa de explantes regenerantes. Após a obtenção do protocolo de regeneração, foi realizado teste de sensibilidade dos explantes ao antibiótico de seleção, determinando-se a concentração de 75 mg L-1 de canamicina como ideal para selecionar as células transformadas. Para a regeneração de brotações os explantes foram cultivados em meio MS contendo 0,9 mg L-1 BAP, 0,3 mg L-1 ABA, 2,2 g L-1 CaCl2, 75 mg L-1 canamicina e 250 mg L-1 cefotaxima. Para a transformação genética, foi utilizado Agrobacterium tumefaciens LBA 4404, com um clone da ACC oxidase em orientação antisense, denominado pAP4as. Entretanto, não foi confirmada a inserção da seqüência, pelo teste de PCR, nos tecidos analisados. Verificou-se que estes estudos descritos com Agrobacterium não foram eficientes para a obtenção de plântulas contendo o gene antisense da ACC oxidase.

ASSUNTO(S)

agrobacteruim tumefaciens regeneração biotecnologia melão gaúcho acc oxidase genetica vegetal cucumis melo

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