Quantificação de apoptose e necrose mediante corantes fluorescentes e análise de imagens, no cultivo de células de inseto : o caso da Drosophila melanogaster S2.

AUTOR(ES)

Bruna Gabriela Silva

DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

Em cultivos de células animais existem dois tipos de morte celular: apoptose (morte celular programada) e necrose (morte devido a lesões causadas por fontes externas). O método inovador de identificação dessas mortes de células que tem atraído muito interesse é o uso de microscopia de fluorescência e corantes celulares fluorescentes capazes de tingir moléculas de DNA e RNA. Técnicas de análise de imagem têm se tornado uma ferramenta útil nessa quantificação de morte celular, uma vez que é não destrutiva para a cultura e de fácil aplicação com o uso de softwares adequados. Baseado nessas novas tendências tecnológicas, o presente trabalho teve como meta o desenvolvimento de uma metodologia para quantificação de morte apoptótica e necrótica no cultivo de células de inseto Drosophila melanogaster (S2). Essa metodologia envolveu o desenvolvimento de um procedimento experimental utilizando corantes novos no mercado: o YO-PRO-1 e o Iodeto de Propídio, que têm apresentado vantagens sobre os outros corantes por não serem destrutivos para a cultura e discriminarem claramente a morte apoptótica da necrótica. A metodologia que faz uso destes corantes foi comparada com o método de exclusão por Azul de Tripan e com os corantes fluorescentes Laranja de Acridina e Brometo de Etídio. Além de serem menos tóxicos as células, o YO-PRO-1 e o Iodeto de Propído mostraram mais sensibilidade na identificação da morte e posterior cálculo da viabilidade celular. A metodologia também envolveu o desenvolvimento de um algoritmo baseado em técnicas de análise de imagens para quantificação dos dois tipos de morte celular, menos subjetiva que os métodos manuais atualmente utilizados. O algoritmo se mostrou eficiente, rápido e de fácil aplicação, gerando um erro de 2% quando comparado com a metodologia manual. Também realizou-se o cálculo da concentração celular por método computacional, ficando os valores bem próximos dos experimentais.

ASSUNTO(S)

yo-pro-1 processamento de imagens células de inseto engenharia quimica células - morte image analysis engenharia química s2 cell death yo-pro-1 insect cell

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