Proteínas recombinantes ligadas a TAT e sua aplicação terapêutica na reversão de dano isquêmico de ilhotas pancreáticas : impacto em transplante

AUTOR(ES)

Melina Magalhães Ribeiro

DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

O transplante de ilhotas pode ser uma opção para o tratamento do Diabetes do tipo I em função do aumento do controle metabólico e da qualidade de vida do paciente transplantado. As maiores limitações para a aplicação dessa técnica em larga escala são o alto número de ilhotas necessárias para a obtenção de um bom funcionamento do transplante e a deteriorização de ilhotas, causados por dano isquêmico por preservação a frio. Aqui propomos o uso de nova tecnologia denominada TAT- PTD como transportador de moléculas terapêuticas para o interior de ilhotas e pâncreas com a intenção de prevenir morte de ilhotas, aumentando, assim, o número e a qualidade das ilhotas para transplante de pacientes diabéticos. Resultados da Parte I: Construímos uma proteína de fusão composta por Heme oxigenase -1 (HO1) e o domínio de transdução protéica TAT- PTD (TAT)  um peptídeo viral com 11 aminoácidos provenientes do vírus da imunodeficiência humana (HIV) e com capacidade de penetrar em membrana plasmática. A transdução de TAT-PTD-HO1 em células produtoras de insulina protege contra a ação citotóxica de TNF-α. A transdução de TAT-HO1 para o interior de células produtoras de insulina não danifica a fisiologia de ilhotas como foi mostrado quando estas são transplantadas em camundongos imunodeficientes e com Diabetes quimicamente induzida. Finalmente, mostramos que transdução de ilhotas com a proteína de fusão melhora a viabilidade de ilhotas em cultura. Essa abordagem pode ter um impacto positivo no aumento da disponibilidade de ilhotas para transplante. Resultados da Parte II: A produção de proteínas de fusão ligadas a TAT-PTD pode ser obtida em larga escala e eficientemente com a expressão protéica em E. coli. No entanto, a contaminação com endotoxina representa um problema para a aplicação dessas proteínas in vitro e in vivo. Desenvolvemos várias proteínas de fusão ligadas a TAT que têm aplicação terapêuticas em ilhotas. Apresentamos aqui um novo método para a eficiente remoção de endotoxina de soluções protéicas usando tubos de polipropileno em combinação com tratamento em pH ácido, mantendo a atividade biológica da proteína com bom rendimento protéico. Resultados da Parte III: Para poder detectar possíveis moléculas que possam ser citoprotetoras e que possam ser associadas à tecnologia de TAT-PTD, estabelecemos um modelo de isquemia a frio em pâncreas de ratos. Isso nos permitiu estudar a modulação de vias ativadas por sinal de stress que levam ao impedimento da recuperação da qualidade e função de ilhotas. Observamos que JNK e p38 são proteínas kinase ativadas por stress (SAPK) que estão presentes por causa de dano causado por isquemia pancreática e isolamento de ilhotas. Um experimento preliminar usando TAT-D-JNKi, inibidor de JNK, tentou prevenir dano causado pela ativação de JNK.

ASSUNTO(S)

ptd tat transplante de ilhotas isquemia biologia molecular endotoxina diabetes

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