PCR multiplex para detecção de Campylobacter spp. e Salmonella spp. em carne de frango

AUTOR(ES)

Juliane Alves

FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

15/12/2010

RESUMO

O Brasil é o terceiro produtor e o primeiro exportador mundial de carne de frango, sendo o Estado do Paraná o segundo maior produtor brasileiro. Salmonella spp e Campylobacter spp são as causas mais frequentes de doenças bacterianas transmitidas por alimentos no mundo e os produtos avícolas apontados como os principais veículos de transmissão para o ser humano. O monitoramento dessas bactérias em carne de frango, é fundamental para evitar que barreiras sanitárias possam interferir na comercialização, como também, é essencial para o controle da doença humana. Os métodos convencionais de isolamento de Campylobacter e Salmonella em alimentos podem requerer de quatro a dez dias para a conclusão dos resultados. Métodos moleculares, como a PCR, têm sido otimizados para detecção, identificação e quantificação dessas bactérias em alimentos, devido à rapidez, especificidade e sensibilidade. Embora vários kits comerciais estejam disponíveis, o seu alto custo dificulta o uso nos laboratórios de diagnóstico e controle de qualidade, principalmente em países em desenvolvimento como o Brasil. A padronização de um ensaio molecular específico e, principalmente, a detecção simultânea dessas duas bactérias patogênicas vem de encontro à necessidade desses laboratórios. O objetivo desse trabalho foi otimizar um ensaio de PCR multiplex (mPCR) para a detecção simultânea de Salmonella spp. e Campylobacter spp. em carne de frango. A mPCR otimizada utilizou o par de iniciadores Styinva-JHO-Right e Styinva-JHO-Left, específico para Salmonella spp., que gerou um amplicon de 119 pares de bases. O par de iniciadores específico para Campylobacter spp. foi OT1559 e 18-1 gerando um amplicon de 287 pares de bases. A especificidade do ensaio mPCR otimizado foi de 100%, testada com culturas puras de diferentes sorovares de Salmonella, C. jejuni, C. coli e outras espécies bacterianas. A reação de mPCR otimizada detectou 102 UFC/mL de Campylobacter spp. e 100 UFC/mL de Salmonella spp., após 24 horas de enriquecimento. Das 50 amostras de carne de frango analisadas, adquiridas no comércio de Londrina, duas (4%) estavam contaminadas com Salmonella spp. e 28 (56%) com Campylobacter spp. A presença dessas bactérias foi confirmada pelo método tradicional de cultura. A mPCR padronizada neste trabalho é uma alternativa rápida, barata e eficiente para detecção simultânea de Samonella spp. e Campylobacter spp. em carne de frango, após 24 horas de enriquecimento.

ASSUNTO(S)

reação em cadeia de polimerase alimentos - microbiologia carne de ave - doenças salmonela campylobacter polymerase chain reaction food microbiology poultry as food diseases salmonella

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