Otimização da extração de ácidos nucleicos de material de punção aspirativa por agulha fina de tiroide obtido de lâminas coradas, tecidos fixados em formalina e emblocados em parafina e amostras de sangue estocadas por longo período
AUTOR(ES)
Kizys, Marina M. L., Cardoso, Mirian G., Lindsey, Susan C., Harada, Michelle Y., Soares, Fernando A., Melo, Maria Clara C., Montoya, Marlyn Z., Kasamatsu, Teresa S., Kunii, Ilda S., Giannocco, Gisele, Martins, João Roberto M., Cerutti, Janete M., Maciel, Rui M. B., Dias-da-Silva, Magnus R.
FONTE
Arq Bras Endocrinol Metab
DATA DE PUBLICAÇÃO
2012-12
RESUMO
OBJETIVO: O isolamento adequado de ácidos nucleicos a partir de sangue periférico, lâmina corada de punção aspirativa por agulha fina, tecido fixado em formalina e emblocado em parafina e tecido fresco é fundamental para assegurar o sucesso de técnicas aplicadas em endocrinologia molecular, principalmente quando lidamos com amostras estocadas por longos períodos ou quando há impossibilidade de nova coleta de amostra de pacientes que perderam o seguimento. Neste trabalho, objetivamos otimizar as metodologias clássicas para a extração de DNA (salting-out) e RNA. MATERIAIS E MÉTODOS: Utilizamos proteinase K, choque térmico, dentre outras modificações, com o objetivo de aumentar a quantidade e a qualidade do material recuperado a partir das amostras descritas acima. RESULTADOS: Isolamos com sucesso DNA e RNA de tais amostras e o material obtido foi adequado para a realização de PCR, perfil de metilação, PCR em tempo real e sequenciamento de DNA. CONCLUSÃO: As técnicas aplicadas neste estudo para isolar ácidos nucleicos permitiram a realização posterior de análises moleculares consistentes e confiáveis. Arq Bras Endocrinol Metab. 2012;56(9):618-26
ASSUNTO(S)
dna rna extração de ácido nucleico paaf tecido ffep sangue
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