Isolamento, avaliação do comportamento de amostras de vírus ectima contagioso e melhoramento de técnicas de diagnóstico e de cultivo in vitro.

AUTOR(ES)
FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

13/02/2012

RESUMO

Ectima contagioso (EC) ou orf é uma doença infecto-contagiosa da pele causada pelo vírus do ectima contagioso (ECV) ou ORFV, que acomete principalmente ovinos e caprinos, e ocasionalmente o homem. Protótipo do gênero Parapoxvírus da família Poxviridae, está amplamente disseminado em todo mundo, inclusive no Brasil, especialmente na Região Nordeste, onde a caprinovinocultura é amplamente praticada para a produção de pele, carne e leite. Em Pernambuco, a doença ocorre de forma endêmica e pode ser confundida com enfermidades vesiculares, como a Febre Aftosa (FA), havendo a necessidade de diferenciação, sobretudo como suporte às ações do Programa Nacional de Erradicação da Febre Aftosa (PNEFA). Uma grande limitação no controle da doença é a dificuldade de replicação do vírus em cultivo celular, visando sua manipulação biotecnológica para a produção de vacinas. O objetivo deste trabalho é isolar e avaliar o comportamento de amostras de ECV em cultura primária de células de córnea fetal caprina, além de estabelecer um diagnóstico molecular eficiente para amostras de campo e avaliar o perfil filogenético das amostras de campo estudadas. Amostras de crostas de 22 ovinos e de sete caprinos que apresentavam sinais clínicos de EC, originários dos Estados de Pernambuco, Bahia, Sergipe e Paraíba, foram inoculadas em monocamadas de células epiteliais de córnea de feto caprino, durante sete passagens consecutivas, a intervalos semanais. Para realização do diagnóstico molecular foi utilizado para amplificação de um fragmento de 235pb do gene do envelope B2L o par de primers, PPP-3 e PPP-4 denominados pan-parapoxvirus. Observou-se em todas as passagens, a partir de 24 horas pós-infecção, efeito citopático (ECP) caracterizado pelo arredondamento celular, fusão com formação de pequenos sincícios, vacuolização e corpúsculos de inclusão citoplasmática, com intensidade de 25% a 100% de desprendimento da camada celular, que variou de acordo com a amostra viral. Conclui-se que as culturas de células primárias de córnea fetal caprina mostraram-se altamente permissíveis à replicação do ECV e que as amostras virais isoladas mostraram-se adaptadas ao cultivo utilizado, com pequena variação entre as amostras virais, e que, a identificação viral através da PCR é um método aplicável ao diagnóstico diferencial de enfermidades vesiculares, sobretudo como suporte às ações do PNEFA, no qual caprinos e ovinos são considerados animais sentinelas. A análise filogenética mostrou que as seqüências de ORFV do Nordeste do Brasil estão altamente relacionadas entre si, com seqüências idênticas acima de 99%. Além de apresentarem mais de 80% de identidade com seqüências de outros isolados de ORFV em todo mundo.

ASSUNTO(S)

orf parapoxvírus ectima contagioso pcr medicina veterinaria contagious ecthyma

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