Influence of the electrokinetic injection conditions on the separation of DNA fragments in capillary electrophoresis

AUTOR(ES)

Catai, Jonatan Ricardo, Carrilho, Emanuel

FONTE

Journal of the Brazilian Chemical Society

DATA DE PUBLICAÇÃO

2004-06

RESUMO

Em análises genéticas por eletroforese capilar com soluções poliméricas existem muitas variáveis que afetam a separação dos fragmentos de DNA. Uma das mais críticas é o processo da injeção da amostra, a qual pode afetar consideravelmente a eficiência e a resolução dos picos. Neste trabalho, estudou-se a influência da composição da amostra e as condições da injeção eletrocinética na separação dos fragmentos de DNA em eletroforese capilar com solução polimérica renovável. Os estudos foram realizados injetando-se eletrocineticamente as amostras do DNA sob uma variedade de condições tais como, a força iônica da amostra e sua capacidade tamponante e a qualidade da matriz de separação. Em todos os experimentos, os fragmentos de DNA foram corados com brometo de etídio para detecção por fluorescência induzida a laser e separados sob um campo elétrico de 200 V cm-1 em uma coluna capilar revestida com polialcoolvinílico e preenchida com uma solução 0,5% de hidroxietilcelulose como matriz de separação. Sob estas condições de análise, a composição da amostra deve conter entre 1 e 5 mmol L-1 de tampão de separação para a obtenção de injeções reprodutíveis com um coeficiente de variação menor que 4% tanto para o tempo de migração quanto para a quantidade de material injetado.

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