Identificação e Validação de Genes de Referência para a Normalização no Real-Time RT-qPCR em Arroz e Arroz Vermelho em Competição, sob Diferentes Doses de Nitrogênio
AUTOR(ES)
BENEMANN, D.P., NOHATO, A.M., VARGAS, L., AVILA, L.A, AGOSTINETTO, D.
FONTE
Planta daninha
DATA DE PUBLICAÇÃO
03/04/2017
RESUMO
RESUMO Reação em cadeia da polimerase da transcrição reversa em tempo real (RT qPCR) é uma técnica importante para analisar a expressão diferencial dos genes, devido à sua sensibilidade, exatidão e especificidade. No entanto, antes da análise da expressão do gene alvo, é necessário identificar e avaliar a estabilidade dos genes candidatos a referência para a normalização apropriada. O objetivo deste trabalho foi avaliar a estabilidade de genes candidatos a genes de referência, a fim de identificar os genes mais adequados para normalização da transcrição em arroz e arroz-vermelho em competição, sob diferentes doses de nitrogênio, e demonstrar a eficácia do gene de referência selecionado pela expressão da ascorbato peroxidase citosólica (OsAPX2). Onze genes candidatos a referência foram avaliados usando o aplicativo online RefFinder, que integra os quatro principais programas de software: geNorm, NormFinder, BestKeeper e método comparativo delta Ct, bem como fez-se análise de variância para identificar genes com menores valores de desvio-padrão e coeficiente de variação. Dos 11 genes, oito apresentaram eficiência dentro do padrão desejado, e, destes, o gene UBC-E2 foi o mais estável. A expressão do gene OsAPX2 mostrou-se eficiente para validação do gene candidato a referência. Este estudo é o primeiro levantamento sobre a estabilidade de genes de referência em arroz e arroz-vermelho em competição, fornecendo informações para obtenção de resultados mais precisos em RT-qPCR.
ASSUNTO(S)
oryza sativa expressão gênica normalização
Documentos Relacionados
- Detecção do vírus da cinomose canina por diferentes métodos de One-Step RT-qPCR
- Expression of active BCR related (ABR) gene in chronic myeloid leukemia (CML) real-time RT-PCR (qPCR)
- Transcripts of developmentally regulated Plasmodium falciparum genes quantified by real-time RT–PCR
- Validation of reference genes for RT-qPCR analysis of CYP4T expression in crucian carp
- Expressão dos genes nodC, nodW e nopP em Bradyrhizobium japonicum estirpe CPAC 15 avaliada por RT-qPCR