Identificação de um domínio conservado e antigênico de ATP difosfohidrolases de parasitos, também presente em uma isoforma ativa de Leishmania (Leishmania) chagasi

AUTOR(ES)
FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

01/10/2010

RESUMO

Através do alinhamento de sequências de aminoácidos, análise filogenética e predição de peptídeos, nós demonstramos uma relação evolucionária e estreita relação estrutural entre um domínio particular da apirase de batata e várias proteínas de organismos patogênicos, todos eles pertencentes à família das ATP difosfohidrolases. Um fragmento recombinante baseado neste domínio (rDomB) foi obtido como uma proteína fusionada a hexahistidina. Por ELISA, significativa soropositividade de IgG para o rDomB foi observada em amostras de soros de pacientes (n=30) com esquistossomose (37%) ou leishmaniose tegumentar (40%), mas não para pacientes com doença de Chagas (20%). Adicionalmente, o inóculo de camundongos Balb/c (n=9) com rDomB induziu significativa atividade estimulatória, elevando a quantidade de anticorpos IgG, e as subclasses IgG1 e IgG2a, como observado por ELISA, sugerindo que o rDomB tem epitopos distintos capazes de induzir respostas imune dos tipos Th1 e Th2. Portanto, um domínio específico é sugerido ser potencialmente envolvido na resposta imune, e também parece ter sido conservado durante a co-evolução de hospedeiros e parasitos. Uma proteína predita identificada como NDPase, homóloga à apirase de batata, foi encontrada no genoma de Leishmania infantum (sin. L. (L.) chagasi), o agente causador da leishmaniose visceral canina. Uma atividade ATP difosfohidrolásica foi então caracterizada em preparações de promastigotas de Leishmania (L.) chagasi (MHOM/BR/1972/BH46 strain). A hidrólise de nucleosídeos di- ou trifosfatados sob a ativação de íons bivalentes, não afetada significativamente por outras fosfohidrolases, associadas à inibição promovida pela azida sódica, sugeriram fortemente uma atividade ATP difosfohidrolásica. Western blots desenvolvidos com anticorpos policlonais de coelho anti-apirase de batata ou anticorpos policlonais de camundongo anti-rDomB reconheceram a mesma banda de aproximadamente 50 kDa. Anticorpos anti-apirase de batata ou anti-rDomB imobilizados em Proteína A-Sepharose depletaram em torno de 86% e 41%, respectivamente, de ambas as atividades ATPásica e ADPásica de uma preparação de promastigotas solubilizada em C12E9. Os complexos resina-anticorpo de coelho-antígeno e resina-anticorpo de camundongo-antígeno foram separados por SDS-PAGE, e Western blots desenvolvidos, respectivamente, com anticorpos policlonais de camundongo anti-rDomB ou anticorpos policlonais de coelho anti-apirase de batata identificaram a mesma banda de 50 kDa. Por Western blots e ELISA, usando apirase de batata como antígeno, reatividade significativa de anticorpos IgG foi observada em soros de cães com leishmaniose visceral (INF; n= 38), domiciliados em área endêmica, sugerindo que aqueles epitopos compartilhados são antigênicos. A soropositividade de IgG do grupo INF (38%) para o rDomB foi elevada, e significativamente (P<0,001) maior que aquela encontrada em cães saudáveis também domiciliados em área endêmica (n=18; 12%). A soropositividade de anticorpos IgG para o rDomB foi significativamente maior em grupo de cães clinicamente classificados como sintomático (n=15; 67%) quando comparado aos grupo de assintomáticos (n=11; 18%) ou oligosintomáticos (n=12, 18%). Análise individual revelou variável reatividade de anticorpos IgG1 e IgG2 para rDomB, sugerindo que diferentes epitopos poderiam estar envolvidos na susceptibilidade ou resistência a leishmaniose visceral canina. Concluindo, nossos resultados confirmaram que uma isoforma de ATP difosfohidrolase ativa é expressa em promastigotas de L. (L.) chagasi, e que ela tem um domínio conservado e antigênico compartilhado com a apirase de batata. Além disso, nós indicamos o rDomB como uma nova biomolécula a ser testada em protocolos de estudos da leishmaniose visceral canina

ASSUNTO(S)

l. infantum apirase de batata filogenia conservação domínio peptídeo anticorpo humano cão camundongo leishmaniose visceral canina l. infantum potato apyrase phylogeny conservation domain peptides antibody human dog mouse canine visceral leishmaniasis genetica

ACESSO AO ARTIGO

Documentos Relacionados