Identificação de peptídeos ligantes ao veneno de Dinoponera australis (Hymenoptera, Formicidae, Ponerinae) por phage display

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

O gênero Dinoponera apresenta seis espécies, todas com distribuição pela América do Sul, sendo que a Dinoponera australis é encontrada do Mato Grosso até o Rio Grande do Sul e países vizinhos. Essas formigas são caracterizadas pela presença de uma glândula de veneno que é responsável pela produção de uma toxina, constituída em sua maior parte por proteínas. Este trabalho teve como objetivo: (a) identificação de peptídeos ligantes específicos ao veneno de D. australis por Phage Display, (b) testar a inibição da atividade hemolítica pelos fagos selecionados conjugados com o veneno, (c) analisar a atividade nucleásica do veneno e (d) demonstrar se as partículas de fago são inativadas pelo veneno. Duas bibliotecas comerciais de peptídeos randômicos foram utilizadas: Ph.D.-7 Heptapeptide Phage Display Library e Ph.D.-12 Peptide 12-mer Phage Display Library. Após três etapas de seleção, 96 clones tiveram sua seqüência de DNA determinada e foram traduzidos, gerando 40 sequências válidas e 21 peptídeos distintos. As análises de bioinformática identificaram 3 pequenos motivos proteicos: KVWxL, WxLL e KLxTIPM. A análise de similaridade encontrou como prováveis alvos em Humanos receptores celulares, fatores de transcrição, proteínas relacionadas a processos inflamatórios, canal de cálcio e receptor de proteína G. Já em insetos, a análise apontou como possíveis alvos canal de potássio, citocromo, ATPase, fator de transcrição e proteinase. O teste da atividade hemolítica dos fagos selecionados conjugados com veneno foram todos positivos demonstrando que nenhum dos nove peptídeos testados foi capaz de influenciar na ação do veneno. O teste de atividade nucleásica mostrou que nas concentrações de 2,5μg de veneno obteve-se um rastro que indica uma possível degradação do DNA. A concentração de 10μg de veneno bruto não foi capaz de inativar as partículas de fago. Tivemos successo na identificação de peptídeos de interesse, ligantes específicos ao veneno de D. australis por Phage Display, os quais podem ser moléculas alvo importantes para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas.

ASSUNTO(S)

veneno peptídios genetica venom dinoponera australis formiga phage display

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