Expressão estável de tireotrofina humana (r-hTSH) em células de mamífero CHO que expressam 2,6-sialiltransferase / STABLE EXPRESSION OF HUMAN THYROTROPIN (hTSH) IN MAMMALIAN CELLS (CHO) EXPRESSING 2,6 SIALYLTRANSFERASE

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

2009

RESUMO

Uma linhagem celular de CHO, previamente modificada geneticamente pela introdução de cDNA da 2,6 sialiltransferase de rato, gerou, pela primeira vez, um hTSH recombinante com sialilação humanizada (hlsr-hTSH), mais similar ao hormônio nativo, com 61% de ligação de ácido siálico na conformação 2,3 e 39%, na conformação 2,6. O clone mais produtivo, quando submetido à amplificação gênica com 8 M de metotrexato, apresentou um nível de secreção de aproximadamente 2 g de hTSH/106 células/dia, nível este útil para a purificação e caracterização do produto. A massa molecular relativa do heterodímero e das subunidades e do hlsr-hTSH purificado, determinada por espectrometria de massa MALDI-TOF, e a hidrofobicidade relativa, determinada por RP-HPLC, não apresentaram diferenças significativas com relação às preparações de hTSH recombinante derivadas de células CHO sem a modificação devida ao gene da 2,6 sialiltransferase. Entretanto, algumas diferenças foram observadas na composição dos N-glicanos, com mais estruturas tri- e tetra-sialiladas no hlsr-hTSH. O hlsr-hTSH mostrou-se eqüipotente (p>0,05) à preparação comercial de r-hTSH (Thyrogen) e 1,5 vezes mais potente do que a preparação nativa de hTSH (p<0,001), quando analisado por um bioensaio in vivo baseado na capacidade do TSH de estimular a liberação de T4.

ASSUNTO(S)

Ácido siálico a2 tireotrofina sialilação humanizada 6-ligado 3-ligado células cho 6-ligado células cho n-glicanos. sialilação humanizada ácido siálico a2 tireotrofina 3-ligado n-glicanos.

ACESSO AO ARTIGO

Documentos Relacionados