Estudos funcionais de genes envolvidos na manutenção da estabilidade genômica : caracterização de gene hHC1 humano e da DNA polimerqase -PAK de Trypanosoma cruzi.

AUTOR(ES)

Debora de Oliveira Lopes

DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

As células dispõem de diversos sistemas para proteger o material genético dos danos causados por agentes ambientais ou por produtos provenientes do próprio metabolismo. Entre esses sistemas, encontramos o reparo de DNA, constituído por diferentes proteínas que atuam em diversas vias enzimáticas, de acordo com o tipo de lesão gerada. Cada vez torna-se mais evidente a importância de estudos envolvendo fatores associados a sistemas que protegem o material genético, a fim de evitar doenças genéticas ou desordens que podem resultar na morte do organismo. Diante deste fato, faz-se necessário a caracterização de novos genes envolvidos no processo de manutenção da estabilidade genômica. Esse trabalho apresenta a caracterização funcional de dois genes, ambos envolvidos na manutenção da estabilidade genômica: o hHC1 humano e o da DNA polimerase -PAK de Trypanosoma cruzi. O gene hHC1 (human heterolougous complementation gene 1), isolado a partir de uma biblioteca de cDNA humano fetal, foi que capaz de corrigir o fenótipo de sensibilidade ao agente genotóxico metil-metano sulfonato (MMS) de uma cepa de E. coli, deficiente no reparo por excisão de base. A seqüência nucleotídica deste clone revelou a presença de três janelas abertas de leitura. Cada uma das JALs foi testada em curvas de sobrevivência e somente a maior delas, com 60 aminoácidos, apresentou a atividade de complementação funcional em bactérias. Além disso, esse gene foi capaz de complementar funcionalmente a deficiência em genes envolvidos no reparo por excisão de nucleotídeos, in vivo e in vitro, após o tratamento com a luz UV. O gene da DNA polimerase -PAK de Trypanosoma cruzi, o causador da doença de Chagas, codifica uma enzima que apresenta atividade de polimerase com baixa capacidade de distinção entre seus substratos, ou seja, é uma DNA polimerase mais permissiva. Provavelmente ela possa atuar como uma enzima acessória, que resolve estruturas pouco usuais, que normalmente não seriam resolvidas pela DNA polimerase . Portanto, nesse trabalho, iniciamos a caracterização, com experimentos in vivo e in vitro, de dois genes, um humano e outro de Trypanosoma cruzi, envolvidos na manutenção da estabilidade do genoma. O entendimento sobre os processos de replicação e reparo do DNA é fundamental para entendermos a variabilidade genética em T. cruzi, assim como, para o estudo de possíveis drogas para o tratamento da doença de Chagas. Por outro lado, o estudo de genes humanos nos permite entender o desenvolvimento desse organismo e, também, de possíveis doenças associadas com a atividade de genes relacionados ao metabolismo do DNA.

ASSUNTO(S)

tripanossoma cruzi.

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