Estudo do mecanismo de ação do peptídeo hipotensor TsHpt-I isolado da peçonha do escorpião Tityus serrulatus e de seus análogos estruturalmente minimizados

AUTOR(ES)

Flavia Figueiredo de Rezende

DATA DE PUBLICAÇÃO

2009

RESUMO

Peptídeos potenciadores de bradicinina (PPB) podem ser encontrados em diferentes fontes animais, e, do ponto de vista estrutural, estes peptídeos apresentam uma assinatura contendo um resíduo de ácido piroglutâmico no N-terminal e dois resíduos de prolina na porção C-terminal. O peptídeo TsHpt-I foi previamente isolado da peçonha do escorpião amarelo Tityus serrulatus e descrito como um PPB. Embora apresente o motivo estrutural Pro-Pro, este peptídeo não inibe a enzima conversora de angiotensina (ECA), como descrito para outros PPBs conhecidos, além de ser capaz tanto de potenciar a bradicinina quanto induzir uma rápida e transiente hipotensão in vivo em ratos normotensos. Para avaliar a possível participação de receptores de bradicinina na hipotensão mediada pelo TsHpt-I, células CHO transfectadas com os receptores de bradicinina e marcadas com DAF foram observadas por microscopia confocal perante o estímulo com TsHpt-I. Foi possível observar um aumento na fluorescência induzida pela produção de óxido nítrico em células estimuladas com BK (controle) e TsHpt-I. Análises de western blotting em células CHO-B2 mostraram a fosforilação da Ser1177, o resíduo excitatório da eNOS, na presença de BK e TsHpt-I, corroborando os resultados obtidos pela microscopia confocal. Em ensaio semelhante ao utilizado em células CHO-B2, a liberação de óxido nítrico foi avaliada em cardiomiócitos, que expressam constitutivamente os receptores de cininas. Nestas células, o peptídeo TsHpt-I, assim como a bradicinina, também induziram a liberação de NO, sendo este efeito abolido por HOE 140, um antagonista de B2R. Um análogo sintético estruturalmente minimizado, de apenas três aminoácidos (KPP), foi capaz de manter a atividade observada para o peptídeo integro. A acetilação da cadeia lateral da lisina (acKPP), aboliu a liberação de oxido nítrico, sugerindo que a carga positiva deste aminoácido seja essencial para o efeito agonista dos peptídeos no receptor. Ao estimular os cardiomiocitos com o análogo KPP na presença de HOE 140, a fluorescência também foi abolida, assim como observado para TsHpt-I. Em cardiomiocitos de animais duplo knockout para B1/B2, não houve liberação de NO nas presenças de BK, TsHpt-I e KPP. Neste experimento, somente o grupo controle positivo (Ang(1-7)) aumentou a fluorescência. Os resultados sugerem a ativação direta de B2R como o modo de ação primário de TsHpt-I, sendo que o peptídeo análogo, de apenas três aminoácidos, é capaz de manter este efeito. Foi ainda observado que a carga positiva da cadeia lateral da lisina é essencial para esta atividade.

ASSUNTO(S)

inibidores da enzima conversora da angiotensina. peptídeos teses. tityus serrulatus teses. bioquímica teses. bradicinina teses.

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