Estudo comparativo e validação de três técnicas de PCR em tempo real (qPCR) para diagnóstico de Peste Suína Africana
AUTOR(ES)
Ribeiro, Eduardo L., Oliveira, Anna G.G., Laguardia-Nascimento, Mateus, Mata, Camila Pacheco Silveira Martins da, Reis, Jenner K.P. dos, Fonseca Júnior, Antônio A.
FONTE
Pesq. Vet. Bras.
DATA DE PUBLICAÇÃO
2016-06
RESUMO
Resumo: Este estudo verificou o desempenho de três técnicas de PCR quantitativa (Real-Time) para o diagnóstico de Peste Suína Africana, uma doença exótica no Brasil, a partir de amostras de tecidos. As três técnicas escolhidas baseiam-se na amplificação de sequências do gene da proteína viral VP72 e são preconizadas, cada uma, por laboratórios oficiais da OIE (PSA-OIE), dos Estados Unidos (PSA-USDA) e da União Europeia (PSA-EU), respectivamente. Oligonucleotídeos iniciadores e sondas de hidrólise marcadas com fluoróforos foram sintetizados conforme a literatura de referência consultada. Sequências-alvo do DNA viral foram inseridos em plasmídeo sintético, os quais serviram de controle positivo para a padronização das técnicas e otimização de reagentes, determinação dos limites de detecção e testes de verificação de desempenho. Para aferição de repetibilidade e reprodutibilidade das técnicas, as técnicas padronizadas foram repetidas em dias diferentes, por um segundo analista, com alteração no mix comercial de reagentes utilizado e em um equipamento diferente, e também por outro laboratório. Realizaram-se, ainda, provas de sensibilidade analítica com amostras de DNA viral de referência e especificidade analítica e diagnóstica, com amostras negativas. As técnicas de PSA-EU e PSA-USDA apresentaram-se mais vantajosas quanto ao consumo de iniciadores. Não houve diferenças significativas nos resultados quantitativos variando-se os dias dos ensaios, os analistas, os equipamentos e o mix de reagentes. As três técnicas apresentaram alta especificidade analítica e diagnóstica e sensibilidade diagnóstica. As três técnicas de qPCR mostraram-se eficazes para serem adotadas por um mesmo laboratório para emissão de diagnósticos oficiais de Peste Suína Africana.
ASSUNTO(S)
pcr real-time peste suína africana validação
Documentos Relacionados
- Validação comparativa utilizando PCR quantitativo em tempo real (qPCR) e PCR convencional de sêmen bovino centrifugado em gradiente de densidade contínuo
- Implementation of Real Time Quantitative PCR technique (qPCR) for the monitoring of Microcystis and potentially microcystin-producing genotypes
- PCR em Tempo Real (qPCR) multiplex utilizando SYBR® Green para a detecção e diferenciação de Bartonella henselae e Bartonella clarridgeiae em gatos
- Expression of active BCR related (ABR) gene in chronic myeloid leukemia (CML) real-time RT-PCR (qPCR)
- Detecção de Leishmania chagasi em Lutzomyia longipalpis por meio de qPCR em tempo real:Triagem de genes e mátodos quantitativos.