Efeitos in vitro do flavonóide rutina sobre astrócitos e microglia derivados do córtex cerebral de ratos Wistar neonatos. / The flavonoid rutin, extracted from the Brazilian plant Dimorphandra mollis Benth, induces astrocytes and microglia activation and regulates TNFα and NO release in primary glial cell cultures.

Ana Rita Silva

Os astrócitos e as células microgliais participam da nutrição do neurônio, e da homeostasia, defesa imunitária e detoxificação no sistema nervoso central (SNC). Estas células reagem a danos físicos, químicos ou traumáticos, fenômeno dito gliose, caracterizado por alterações da morfologia celular, dos padrões de expressão de fatores neurotróficos e/ou neurotóxicos, ou pela associação desses dois fenômenos. O flavonóide rutina, comum em muitas plantas medicinais, apresenta várias atividades farmacológicas e já é usado no tratamento de microtraumas, fortalecimento de veias e doenças cerebrais senis. Nossos estudos anteriores revelaram a capacidade deste flavonóide em inibir a proliferação de células de glioma humano (GL15). O presente estudo objetivou avaliar, in vitro, a reatividade das células gliais (astrócitos/microglia) à rutina, em termos de citotoxicidade, alterações na morfologia celular e liberação de TNFα e óxido nítrico (NO). Culturas primárias de astrócitos e culturas primárias mistas (astrócitos/microglia), obtidas do córtex cerebral de ratos Wistar neonatos, foram expostas, por 24h, à rutina (50-100M), ou a 0,5% DMSO (controle negativo), ou ao LPS (1g/ml) (controle positivo). O teste do MTT não mostrou citotoxicidade da rutina para nenhum dos dois tipos de culturas; no entanto, a medida da lactato desidrogenase mostrou um aumento significativo (P<0,05) desta enzima no meio de cultura das células expostas a 100M de rutina, em ambas as culturas, indicando perda da estabilidade de membrana. Modificações fenotípicas foram observadas em ambos os sistemas de cultura, através da coloração de Rosenfeld, imunocitoquímica (ICQ) e westernblot (WB) das proteínas GFAP e OX-42, que variaram segundo a dose de rutina adotada. Quando tratados com a dose de 50M, os astrócitos apresentaram contração do corpo celular e emissão de prolongamentos, acompanhadas de aumento da expressão de GFAP; astrócitos tratados com 100M de rutina apresentaram forte contração do corpo celular e longos prolongamentos, com fenótipo estrelado, alterações estas mais visíveis nas culturas mistas, em que foram acompanhadas da diminuição nos níveis de expressão da GFAP. Nas culturas mistas, foi verificado aumento do número de células positivas para OX-42, indicando microglia com fenótipo tipicamente macrofágico; a análise por WB indicou aumento da expressão desta proteína nos extratos protéicos de ambos os sistemas de cultura tratados com rutina (50-100M). Em condições controle, os níveis de nitrito, que reflete o NO liberado pelas células, foram baixos para ambos os sistemas de culturas. Mudanças significativas nos níveis de nitrito somente foram detectadas nas culturas mistas tratadas com 100M de rutina (P<0.001). O ELISA revelou aumento significativo nos níveis de TNFα para as culturas tratadas com 100M de rutina (P<0,05), em relação ao controle. Nas culturas mistas, em condições controle, os níveis desta citocina foram maiores e aumentaram significativamente após tratamento com o flavonóide. O conjunto destes resultados indica uma ação direta da rutina sobre células gliais, in vitro, induzindo ativação celular, caracterizada por alterações morfológicas e mudanças nos níveis de expressão de fatores pró-inflamatórios e de neuromediadores. Ainda, estes resultados sugerem que o NO e o TNFα possam ser mediadores químicos envolvidos nas funções imunomodulatórias das células da microglia no SNC, em resposta a agentes externos tais como flavonóides.

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