DEUNER, Carolina Cardoso. Artificial inoculation and detection of Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens in bean seeds. 2007. 120p. Thesis (Doctorate in Agronomy - Phytopathology) â Federal University of Lavras, Lavras, MG.* / âInoculaÃÃo artificial e detecÃÃo de Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens em sementes de feijÃoâ

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

DEUNER, Carolina Cardoso. InoculaÃÃo artificial e detecÃÃo de Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens em sementes de feijÃo. 2007. 120p. Tese (Doutorado em Agronomia â Fitopatologia) â Universidade Federal de Lavras, Lavras, MG.* Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff), agente causal da murcha-de-curtobacterium, foi relatado pela primeira vez, no Brasil, em 1995. Apesar de relativamente novo no paÃs, o patÃgeno està disseminado pelas principais regiÃes produtoras de feijÃo, causando grandes prejuÃzos econÃmicos. As sementes constituem a sua principal forma de sobrevivÃncia e disseminaÃÃo. Portanto, o presente trabalho teve como objetivos desenvolver uma tÃcnica eficiente de inoculaÃÃo, baseada no condicionamento fisiolÃgico do meio, e de detecÃÃo, utilizando-se a PCR, de Cff em sementes de feijÃo, para uso em pesquisas e em laboratÃrios de anÃlise fitossanitÃria de sementes. Para o desenvolvimento da tÃcnica de inoculaÃÃo artificial utilizou-se o condicionamento fisiolÃgico em substrato agarizado. Testaram-se quatro substratos (meio 523, meio 523+KCl, meio 523+manitol e meio 523+sacarose), quatro potenciais hÃdricos (-0,55, -0,75, -0,95 e -1,15 MPa) e cinco tempos de exposiÃÃo da semente ao meio 523 (24, 48, 72, 96 e 120 horas). A inoculaÃÃo artificial consistiu na exposiÃÃo das sementes de feijÃo, por 48 horas, ao isolado de Cff, proveniente do estado de Santa Catarina (Cff SC - Feij-2928), no meio 523 com o restritor hÃdrico manitol no potencial hÃdrico de -0,95 MPa. Esse tratamento foi o que menos afetou a percentagem de germinaÃÃo das sementes apÃs o condicionamento fisiolÃgico. Para a otimizaÃÃo da tÃcnica de PCR, foram comparados dois pares de primers descritos na literatura para a detecÃÃo dessa bactÃria. Um foi desenvolvido a partir de biblioteca cromossomal, construÃdo em plamÃdeo (CF4-CF5) e o outro a partir do fragmento amplificado via PCR baseado na seqÃÃncia repetitiva (Rep-PCR) (CffFOR2-REV4). O par de primers CffFOR2-REV4 demonstrou maior repetibilidade e eficiÃncia na detecÃÃo de Cff em sementes de feijÃo. Foram testados tambÃm quatro mÃtodos de preparaÃÃo do extrato de sementes para a obtenÃÃo do DNA de Cff a ser utilizado na PCR: extrato bruto, obtido diretamente das sementes; extrato concentrado em membrana milipore; extrato concentrado por centrifugaÃÃo e extrato plaqueado em meio seletivo (BioPCR). Dentre esses mÃtodos, tanto a Bio-PCR quanto o extrato concentrado por centrifugaÃÃo, seja no volume de 20 ou 80 mL, amplificaram segmento de DNA de 306 pb, caracterÃstico da presenÃa de Cff. Essas duas tÃcnicas apresentam boa sensibilidade, permitindo a detecÃÃo de atà uma semente contaminada com Cff, em 999 sementes sadias. Portanto, foi possÃvel desenvolver uma tÃcnica rÃpida, sensÃvel, confiÃvel e de fÃcil execuÃÃo para a detecÃÃo de Cff em sementes de feijÃo, constituindo-se em metodologia potencial para uso rotineiro em laboratÃrios de anÃlise fitossanitÃria de sementes.

ASSUNTO(S)

murcha-de-curtobacterium fitopatologia semente inoculaÃÃo seeds pcr inoculation pcr murcha-de-curtobacterium physiological conditioning restriÃÃo hÃdrica

ACESSO AO ARTIGO

Documentos Relacionados