Desenvolvimento de métodos por cromatografia líquida de alta eficiência muldimensional para validação do uso do biorreator gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase de Trypanosoma cruzi para triagem de inibidores / Multidimensional high-performance liquid chromatography methods development for validating the employment of an immobilized enzyme reactor of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase of Trypanosoma cruzi for inhibitors screening

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

Este trabalho descreve a quantificação do NADH formado pela reação do biorreator da enzima gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) de T. cruzi usando cromatografia liquida de alta eficiência multidimensional. Para isto, o biorreator foi usado na primeira dimensão e uma coluna analítica C8 na segunda dimensão. As etapas de pré-tratamento dos capilares de s匀ica fundida e da imobilização covalente da enzima, neste suporte, foram otimizadas com sucesso, resultando no aumento da atividade e da estabilidade da enzima. Os estudos cin騁icos para a enzima GAPDH-Tc imobilizada foram realizados para verificar se o método de imobilização empregado afetou a afinidade da enzima pelo substrato ou cofator. Os resultados obtidos com os biorreatores das enzimas GAPDH-Tc e humana foram comparados 瀲ueles obtidos com as enzimas em solução, e evidenciaram que o método de imobilização covalente afetou principalmente a afinidade da enzima humana pelo substrato. Os biorreatores das enzimas do parasita e humana foram empregados para a triagem de ligantes. Os ligantes reconhecidos pelos biorreatores foram os mesmos identificados pelas enzimas em solução, evidenciando que a enzima imobilizada reteve a capacidade de reconhecer os compostos capazes de modular a atividade enzim疸ica. Os biorreatores mostraram-se uma ferramenta 偀il na caracterização dos inibidores quanto ・reversibilidade da ligação. Considerando os altos custos e as dificuldades envolvidas na purificação de enzimas, os procedimentos descritos neste trabalho representam um valioso método para preservar a atividade enzim疸ica e para a realização de uma variedade de ensaios bioquímicos.

ASSUNTO(S)

chagas, doença de imobilização de enzimas gapdh cromatografia líquida de alta eficiência quimica inibidores enzimáticos

ACESSO AO ARTIGO

Documentos Relacionados