Desenvolvimento de colunas para UPLC

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DATA DE PUBLICAÇÃO

1988

RESUMO

O interesse cresecnte em técnicas de alta resolução e a importância atual dos fatores econômicos têm levado ao desenvolvimento de colunas cromatográficas de dimensões cada vez mais reduzidas. O objetivo deste projeto é o desenvolvimento de métodos de empacotamento de colunas para HPLC, dando ênfase às colunas com diâmetro interno da ordem de 2mm, genericamente denominadas "microcolunas", visando a uma substancial economia de reagentes, sem, contudo, onerar a técnica cromatográfica. As colunas vazias foram montadas com tubos de aço inoxidável 316, sem costura, através de cortes, tratamentos e adaptações de terminais específicos com volume morto baixo ou nulo. Os tubos conectores também foram montados em nosso laboratório, assim como os reservatórios e adaptadores para o sistema de empacotamento. Para a preparação e avaliação das colunas realizou-se uma otimização dos sistemas de empacotamento e cromatográficos através da adaptação de conexões adequadas e da redução das dimensões dos tubos e conectores. A variância dos sistemas cromatográficos mostrou-se adequada ao emprego das colunas estudadas. Os resultados obtidos com a avaliação e colunas preparadas com silica gel ligada quimicamente a ODS, mostraram que altas vazões durante o empacotamento são mais criticas que pressões muito elevadas, produzindo melhores colunas tanto para a HPLC quanto para a "Micro-HPLC". As suspensões preparadas com solventes de baixa viscosidade mostraram-se adequadas, e a densidade da mistura de solventes não se apresentou tão relevante. O estudo da influência do diâmetro da partícula e comprimento da coluna sobre sua eficiência revelou que o comprimento ideal da coluna a ser empacotada é cerca de 15 a 18 mil vezes o diâmetro da partícula empregada (para partículas de 3, 5 e 10mm de sílica ODS). Foram obtidas colunas convencionais com eficiência similar ou melhor que daquelas disponíveis no mercado, cerca de 70 mil pratos teóricos por metro para partículas esféricas de sílica ODS,- 5mm (h ~ 2,8). A performance das colunas com diâmetro reduzido superou as expectativas. Colunas com 2mm de diâmetro empacotadas com partículas de 10mm apresentaram número de pratos teóricos superior a 40 mil por metro (h ~ 2,3). A aplicabilidade das microcolunas mostrou-se perfeitamente viável, tanto em pesquisa quanto em rotina, permitindo o uso de equipamentos convencionais com pequenas modificações e pouquíssimo ônus, o que é rapidamente recuperado diante da economia de 80% na quantidade de fase estacionária e um consumo 20 vezes menor de fase móvel, em relação às colunas de 4,6mm de diâmetro interno. Há ainda as vantagens com relação ao emprego de menor quantidade de amostra com a mesma sensibilidade de massa e a possibilidade do acoplamento de 2 ou mais colunas sem perdas na eficiência, permitindo a resolução de misturas complexas, como as de compostos do carbono per-halogenados.

ASSUNTO(S)

cromatografia liquida de alta eficiencia

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