Construção e transfecção de vetores plasmidiais contendo o gene da glicoproteína do vírus da raiva (GPV) em células de Drosophila melanogaster / Constuction and transfection of plasmid vectors with rabies vírus glycoprotein (RVGP) gene in Drosophila melanogaster cells

AUTOR(ES)

Marcos Alexandre Nobre Lemos

DATA DE PUBLICAÇÃO

2009

RESUMO

O cDNA da glicoproteína do vírus da raiva (GPV) foi clonado em vetores plasmidiais (indutíveis) contendo ou não o cDNA do sinal de secreção BiP e da resistência ao antibiótico higromicina B. Esses vetores foram transfectados em células S2 e foram obtidas populações e subpopulações. A população S2MTGPV-H apresentou níveis 5x maiores na expressão da GPV em análise por FACS (~ 50% das células) e por ELISA (~ 0,65 µg/107 células). A seleção de subpopulações permitiu um aumento de aproximadamente 10x na expressão da GPV, especialmente na população S2MTGPV*-H. O tratamento com NaBu resultou em uma redução de aproximadamente 20% no crescimento celular e um aumento de 50% na GPV expressa pela população S2MTGPV*-H (~ 8,3 µg/107 células). O meio de cultura SF900 II permitiu um maior crescimento das células S2MTGPV*-H e uma maior síntese de GPV comparado com outros meios de cultura. Nossos dados mostram que a expressão da GPV pôde ser otimizada através da construção de vetores de expressão/seleção, subpopulações, da exposição da cromatina e do meio de cultura utilizado.

ASSUNTO(S)

célula de inseto sinal de secreção bip drosophila melanogaster proteína recombinante drosophila melanogaster rabies virus glycoprotein glicoproteína do vírus da raiva expressão gênica insect cell gene expression bip secretion signal recombinant protein

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