Clonagem e expressão de um gene da família Cry1A de Bacillus thuringiensis em Escherichia coli / Cloning and expression of Bacillus thuringiensis Cry1A gene family member in Escherichia coli

AUTOR(ES)

Barzan, Barbara Bêz

DATA DE PUBLICAÇÃO

2010

RESUMO

Bacillus thuringiensis é uma bactéria Gram-positiva, entomopatogênica, aeróbia e amplamente utilizada como biopesticida para controle de insetos-praga de culturas importantes. Estas bactérias são encontradas normalmente no solo, na superfície de folhas e também como patógenos de muitos insetos. Elas são capazes de se manter em latência, sob forma de endósporos, em condições adversas. Durante a fase de esporulação, as bactérias sintetizam proteínas que se acumulam na periferia dos esporos sob forma de cristais. Estes cristais são compostos por aglomerados de proteínas Cry inativas, sob a forma de protoxinas de 130 kDa, também chamadas de delta-endotoxinas. As proteínas Cry são tóxicas para membros da classe Insecta, bem como para outros invertebrados, como membros do filo Nematoda. Esse trabalho teve como objetivos a clonagem e a expressão de um gene pertencente à família Cry1A da linhagem UNI498 de Bacillus thuringiensis, isolada do solo do Rio Grande do Sul. Um fragmento de aproximadamente 1900 pb, correspondendo às regiões amino e central da proteína Cry, foi amplificado por PCR usando iniciadores especificamente projetados. Este fragmento foi clonado em pGEM® T-Easy e quase totalmente sequenciado. A sequência de nucleotídeos obtida, bem como a de aminoácidos, foi comparada com sequências de genes e proteínas da família Cry1A disponíveis no GenBank. Uma alta identidade foi observada entre as sequências do fragmento amplificado e sequências pertencentes à subfamília Cry1Aa. Análises filogenéticas corroboraram a classificação do gene isolado da linhagem Bt UNI498 como pertencente a essa subfamília. Tentativas de expressar a proteína Cry1Aa isolada em E. coli foram realizadas utilizando-se os vetores de expressão pGEX e pET23a, sem resultados positivos. Novas clonagens estão em andamento a fim de se obter um extrato protéico de E. coli com a nova proteína Cry1Aa, para posteriores bioensaios de toxicidade em lagartas de Anticarsia gemmatalis.

ASSUNTO(S)

bacillus thuringiensis anticarsia gemmatalis clonagem expressão gênica

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