Clonagem e expressão de um fragmento variável em cadeia única contra a toxina termo-lábil de Escherichia coli enterotoxigênica. / Cloning and expression of a single-chain fragment variable against heat-labile toxin of enterotoxigenic Escherichia coli.
AUTOR(ES)
Christiane Yumi Ozaki
FONTE
IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia
DATA DE PUBLICAÇÃO
09/12/2011
RESUMO
O diagnóstico da infecção por ETEC é baseada na detecção dos seus principais fatores de virulência, as toxinas termo-lábil e termo-estável, através de métodos de biologia molecular ou imunossorológicos. A tecnologia de anticorpos recombinantes permite a obtenção de moléculas com baixo custo, afinidades e especificidades desejáveis, através da clonagem dos domínios variáveis das cadeias leve e pesada da imunoglobulina, fusionados a um ligante flexível que permite a correta interação entre os domínios e a preservação do sítio de ligação ao antígeno. Este estudo teve como objetivo a construção de um fragmento variável em cadeia única (scFv), a partir de hibridomas produtores de anticorpo monoclonal anti-LT, seguida da sua produção em células bacterianas. Um fragmento variável em cadeia única com 723 pb foi obtido, sendo expresso em cepa de Escherichia coli como uma proteína com peso molecular aparente de 30 kDa. Após purificação em cromatografia de afinidade a Ni2+ e renaturação, o scFvLT foi capaz de reconhecer a toxina LT por ELISA de captura e Immunodot, porém não foi capaz de reconhecer as subunidades da toxina LT, por Immunoblotting, nem de neutralizar sua atividade citopática em células adrenais Y1.
ASSUNTO(S)
escherichia coli escherichia coli immunoblotting anticorpos recombinantes clonagem cloning expressão gênica gene expression hibridomas hybridomas immunoblotting recombinant antibodies
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