Caracterização parcial de uma Ca2+ -ATPase de larva de Pachymerus nucleorum (Coleoptera: Chrysomelidae: Bruchinae)

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

2006

RESUMO

RESUMO GERAL - O babaçu (Orbignya sp.) é uma palmeira que ocupa vastas áreas na região meio-norte do Brasil e desempenha um papel importante na subsistência de milhares de habitantes desta região. Pachymerus nucleorum é um besouro da subfamília Bruchinae, cujos representantes são conhecidos como brocas de sementes, que causa muitos danos nas castanhas do babaçu. As larvas deste animal penetram o coco de babaçu logo após sua eclosão, se desenvolvem alimentando-se das castanhas e somente emergem como adultos. Neste trabalho, estudamos a atividade enzimática de hidrólise de ATP por uma fração protéica parcialmente purificada a partir das larvas de P. nucleorum sem o aparelho digestivo. As larvas foram extraídas dos cocos, lavadas e dissecadas para a retirada do aparelho digestivo. Seguimos o processo de purificação a partir do restante do corpo e obtivemos a fração precipitada (P3) com alta atividade ATPásica em presença de cálcio, que foi caracterizada. A dosagem da atividade ATPásica foi realizada incubando-se amostras das frações em meio de reação tamponado contendo ATP 1 mM em concentração final e os respectivos cátions metais em 4 mM. A fração ATPase não apresentou atividade significativa em 2 presença de magnésio, cobalto, cobre, zinco, bário, lítio ou ferro. Mesmo na ausência de cátions (EDTA ou EGTA 5 mM) a atividade ATPásica é baixa, mas não nula. Esta alta atividade Ca2+-ATPásica é inibida em presença de cobalto, cobre, zinco, bário ou ferro 4 mM. Há uma sensível inibição (50%) pela presença de magnésio 0,25 mM. A atividade ATPásica de P3, em presença de ATP 1 mM, chega a 50% com CaCl2 0,5 mM, atingindo um platô com 2 mM. Com CaCl2 1 mM, a atividade ATPásica atinge 50% com 0,7 mM de ATP e o pico com 2 mM. Contudo, observa-se que há um leve decaimento desta atividade com concentrações de ATP maiores que 2 mM. P3 não utiliza pirofosfato nem nucleotídeos mono e difosfato para sua atividade, e a atividade Ca2+-GTPásica é apenas 20% da Ca2+-ATPásica. Esta fração não sofre inibição significativa por vanadato (em concentrações menores que 200 M), azida, Triton X-100 ou fluoreto de alumínio. Tal fração é estável a 4 C por pelo menos 12 dias, porém seu congelamento (20 C) causa perda de mais da metade da atividade com 24 horas de estocagem. A atividade K+/EDTA-ATPásica é 50% da Ca2+-ATPásica, e não ocorreu marcação com anticorpos anti-miosinas II ou V. Neste trabalho obtivemos uma fração enriquecida em atividade Ca2+-ATPásica a partir de larva de Pachymerus nucleorum sem aparelho digestivo, e caracterizamos parcialmente tal atividade. RESUMO - CAPÍTULO I Uma fração com alta atividade Ca2+-ATPásica foi obtida a partir de larvas de Pachymerus nucleorum. As larvas foram dissecadas para a retirada do aparelho digestivo. O restante do corpo foi homogeneizado em tampão de extração e centrifugado a 15000xg por 30 minutos. A fração precipitada resultante P1 foi homogeneizada em tampão de ressuspensão contento Triton X-100 0,2%, incubada por 20 minutos em temperatura ambiente e centrifugada nas mesmas condições. O precipitado, fração P2, foi então homogeneizado em tampão de ressuspensão contendo pirofosfato 50 mM. Após incubação por 20 minutos em temperatura ambiente seguiu-se centrifugação a 40000xg por 30 minutos. A fração precipitada P3 foi homogeneizado em tampão de ressuspensão e apresentou alta atividade Ca2+-ATPásica, que foi caracterizada. A fração P3 não apresentou atividade ATPásica significativa em presença de alguns cátions: magnésio, cobalto, cobre, zinco, bário, lítio ou ferro. A alta atividade Ca2+- ATPásica é inibida em presença de cobalto, cobre, zinco, bário ou ferro 4 mM. Magnésio 0,25 mM causa inibição de 50% desta atividade. Em presença de ATP 1 mM, a atividade ATPásica de P3 chega a 50% com CaCl2 0,5 mM, atingindo um 29 platô com 2 mM. Com CaCl2 1 mM, a atividade ATPásica atinge 50% com 0,7 mM de ATP e o pico com 2 mM. Contudo, observa-se que há um leve decaimento desta atividade com concentrações de ATP maiores que 2 mM. P3 não utiliza pirofosfato nem nucleotídeos mono e difosfato como substratos, e a atividade Ca2+-GTPásica é apenas 20% da Ca2+-ATPásica. Esta fração não sofre inibição significativa por vanadato, em concentrações menores que 200 M, azida, Triton X-100 ou fluoreto de alumínio. A atividade K+/EDTA-ATPásica é 50% da Ca2+- ATPásica, e não ocorreu marcação com anticorpos anti-miosinas II ou V. Neste trabalho obtivemos uma fração enriquecida em atividade Ca2+-ATPásica a partir de larva de Pachymerus nucleorum sem aparelho digestivo, e caracterizamos parcialmente tal atividade.

ASSUNTO(S)

bruchinae pachymerus nucleorum genetica ca2+ -atpase

ACESSO AO ARTIGO

Documentos Relacionados