Caracterização bioquimica de glicosiltransferase de Klebsrella sp e produção de isomaltulose a partir de sacarose

AUTOR(ES)

Regina Tomie Uekane

FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

02/12/1993

RESUMO

Duzentas e cinqüenta e oito linhagens de microrganismos foram isoladas de amostras de melaço de cana-de-açúcar, frutas e flores, e testadas quanto a capacidade de converter a sacarose em palatinose. Entre estes microrganismos foi selecionada uma linhagem identificada como Klebsiella sp produtora de glicosiltransferase, que catalisa a conversão de sacarose em palatinose. Estudou-se a produção e a caracterização bioquímica de glicosiltransferase intracelular da linhagem de Klebsiella sp n° 18. A enzima foi purificada através de fracionamento com sulfato de amônio, cromatografia eln colunas de DEAE-Sephadex A-50 e CM-celulose. A glicosiltransferase apresentou atividade ótima a 35°C e na faixa de pH 6,0 a 6,6. O tratamento térmico da enzima purificada durante 1 hora a 20°C, 25°C, 30°C, 35°C, 40°C, 45°C, 50°C, 55°C resultaram em 5,3%, 10,5%, 13,2%, 15,8%, 18,4%, 31,6%, 92,1% e 100% de inativação.respectivamente. A conversão máxima de sacarose em palatinose foi 86% quando a enzima foi incubada em solução 4% de sacarose em tampão citrato-fosfato 0,05 M pH 6,5 durante 64 horas a 25°C. A atividade enzimática não foi afetada por CuS04, KCI, MgS04, FeCl3 e Pb(CH3COO)2. Os sais MnCI2, CaC12, ZnCI2, BaCl2 e CoCI2, inibiram fracamente a atividade de glicosiltransferase, porém, a enzima foi totalmente inibida por HgC12 e AgN03 na concentração 1 mM. A atividade enzimática foi inibida pelo reagente iodo na concentração 0,1; 1,0 e 10 mM, sugerindo que resíduos tirosina podem estar envolvidos na atividade de glicosiltransferase. Os reagentes p-cloromercuribenzoato e iodoacetamida na concentração 0,1, 1,0 e 10 mM, não inibiram a atividade enzimática. Os valores de Km e Vmáx da enzima purificada foram respectivamente 120 mM e 0,090 μmol de palatinosel minuto.mg de proteína para o substrato sacarose. O peso molecular da glicosiltransferase foi estimado em 74.000 daltons, através de filtração em gel Sephadex G-200.

ASSUNTO(S)

sacarose melaço

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